FRET پېپتىد تېخنىكىسى

فلۇئورېسسېنسېن رېزونانىس ئېنېرگىيىسى يۆتكەش (FRET)

فلۇئورېسسېنسېن رېزونانىس ئېنېرگىيىسى يۆتكەش (FRET) رادىئاتسىيەسىز ئېنېرگىيە يۆتكەش جەريانى بولۇپ ، ئىئانە قىلغۇچى ھاياجانلانغان دۆلەت ئېنېرگىيىسى ئۆز ئارا ئېلېكتر جۈپلىرىنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشى ئارقىلىق قوبۇل قىلغۇچى ھاياجانلانغان ھالەتكە يۆتكىلىدۇ.بۇ جەريان فوتونلارنى ئۆز ئىچىگە ئالمايدۇ ، شۇڭا رادىئاتسىيە ئەمەس.بۇ ئەسەرنىڭ تېز ، سەزگۈر ۋە ئاددىي بولۇشتەك ئەۋزەللىكى بار.

FRET تەكشۈرۈشىدە ئىشلىتىلگەن بوياق ئوخشاش بولىدۇ.ئەمما كۆپىنچە قوللىنىشچان پروگراممىلاردا ئوخشىمىغان بوياقلار ئىشلىتىلىدۇ.قىسقىسى ، نۇرلۇق رېزونانس ئېنېرگىيىسىنىڭ يۆتكىلىشى ئىئانە قىلغۇچىلار توپى ھاياجانلانغاندا ئىئانە قىلغۇچىدىن (بوياق 1) قوبۇل قىلغۇچىغا (2-بوياق) بىر جۈپ چۆكمە ماددىنىڭ يۆتكىلىشىدۇر.ئادەتتە ، دونور فتوروفور گۇرۇپپىسىنىڭ قويۇپ بېرىش سپېكترى قوبۇل قىلغۇچى گۇرۇپپىنىڭ سۈمۈرۈلۈش سپېكترى بىلەن قاپلىنىدۇ.«ئىككى خىل فتوروفورنىڭ ئارىلىقى مۇۋاپىق بولغاندا (10 - 100 A) ، فتوروفور ئېنېرگىيىسىنىڭ ئىئانە قىلغۇچىدىن قوبۇل قىلغۇچىغا يۆتكىلىشىنى كۆرگىلى بولىدۇ».ئېنېرگىيە يۆتكەش ئۇسۇلى قوبۇل قىلغۇچىنىڭ خىمىيىلىك قۇرۇلمىسىغا باغلىق:

1. مولېكۇلا تەۋرىنىشىگە ئايلىنىدۇ ، يەنى ئېنېرگىيە يۆتكەشتىكى نۇر يوقىلىدۇ.(قوبۇل قىلغۇچى نۇر ئۆچۈرگۈچى)

2. بۇلغىما قويۇپ بېرىش قوبۇل قىلغۇچىنىڭكىدىنمۇ كۈچلۈك بولۇپ ، ئىككىلەمچى فلۇئورېسسېنسىيە سپېكترىدا قىزىل ئۆزگىرىش پەيدا قىلىدۇ ».(قوبۇللىغۇچىلار نۇر تارقاتقۇچى).

ئىئانە قىلغۇچى گۇرۇپپا (EDANS) ۋە قوبۇل قىلغۇچى گېن (DABCYL) ئەيدىز ۋىرۇسىنىڭ ئاقسىلنىڭ تەبىئىي ئاستى قىسمى بىلەن بىر-بىرىگە باغلانغان بولۇپ ، بالا ھەمراھى ئۈزۈلمىسە ، DABCYL EDANS نى ئۆچۈرۈۋېتەلەيدۇ ، ئاندىن فتورنى بايقىغىلى بولمايدۇ.HIV-1 ئاقسىل ئۈزۈلگەندىن كېيىن ، EDANS ئەمدى DABCYL تەرىپىدىن ئۆچۈرۈلمەيدۇ ، EDANS luciferase نى كېيىن بايقىغىلى بولىدۇ.EDANS نىڭ فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنىڭ ئۆزگىرىشى ئارقىلىق ئاقسىل چەكلىگۈچىنىڭ بار-يوقلۇقىنى نازارەت قىلغىلى بولىدۇ.

FRET پېپتىدلىرى پېپتىدېننىڭ ئېنىقسىزلىقىنى تەتقىق قىلىدىغان قۇلايلىق قورال.ئۇنىڭ ئىنكاس جەريانىنى ئۇدا نازارەت قىلغىلى بولىدىغان بولغاچقا ، ئۇ ئېنزىم پائالىيىتىنى بايقاشقا قۇلايلىق ئۇسۇل بىلەن تەمىنلەيدۇ.ئىئانە قىلغۇچى / قوبۇل قىلغۇچى پېپتىد زايومىنىڭ گىدرولىزلىنىشىدىن كېيىن ئىشلەپچىقىرىلغان شېن نانومولار قويۇقلۇقىدىكى ئېنزىم پائالىيىتىنى ئۆلچەيدۇ.FRET پېپتىد مۇكەممەل بولغاندا ، ئۇ ئىچكى چاقماقنىڭ تۇيۇقسىز يوقاپ كەتكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، ئەمما ئىئانە قىلغۇچى / قوبۇل قىلغۇچىغا قارشى ھەر قانداق پېپتىد رىشتىسى بۇزۇلغاندا ، ئۇ چاقماق لامپىنى قويۇپ بېرىدۇ ، ئۇنى ئۈزلۈكسىز بايقىغىلى بولىدۇ ، ئاندىن فېرمېنت پائالىيىتىنى مىقدارلاشتۇرغىلى بولىدۇ.